C型凝集素受体Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体制备

• 作者: 关建洪 朱乐乐 林欣 贾鑫明
• 来源期刊: 同济大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: C型凝集素受体 Dectin-2蛋白 Dectin-3蛋白 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1-7
• 分类号: R392.11
• 字数: 5074字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn1008-0392.2014.02.001

摘要

目的 克隆人C型凝集素受体dectin-2和dectin-3胞外区基因并进行原核表达及制备它们的单克隆抗体.方法 利用PCR扩增编码人dectin-2和dectin-3胞外区的基因序列,分别克隆到原核表达载体pET28a(+)中,IPTG诱导基因的原核表达;纯化后免疫Balb/c小鼠,融合并筛选获得克隆化的杂交瘤细胞株,制备Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体;利用ELISA、FACS和Western印迹法检测抗体的效价和特异性;检测Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体是否能够特异性阻断相应受体的功能.结果 成功构建原核表达质粒pET28a(+)-Dectin-2和pET28a(+)-Dectin-3,并在E.coli BL21 (DE3)中诱导Dectin-2和Dectin-3胞外区的高效表达.纯化目的蛋白后免疫Balb/c小鼠,融合获得8株Dectin-2和12株Dectin-3的阳性杂交瘤细胞.进一步克隆化筛选获得7株Dectin-2和8株Dectin-3的单克隆细胞株,并且其分泌的抗体能够特异结合Dectin-2和Dectin-3胞外区的原核表达蛋白.利用单克隆细胞株制备小鼠腹水,纯化获得Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体.单克隆细胞株D2-7和D3-2产生的抗体能够特异结合RAW中表达的人Dectin-2和Dectin-3蛋白及小鼠骨髓来源巨噬细胞中Dectin-2和Dectin-3蛋白.抗体功能实验显示:单克隆细胞株D2-7和D2-10产生的抗体能够阻断Dectin-2受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,而单克隆细胞株D3-1和D3-2产生的抗体能够阻断Dectin-3受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,并且具有剂量依赖性及高度特异性.结论 成功获得高纯度的Dectin-2和Dectin-3胞外区蛋白,并分别获得了特异、高效价的单克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱乐乐	同济大学医学院免疫学教研室	2	0	0.0	0.0
2	贾鑫明	同济大学医学院免疫学教研室	5	11	2.0	3.0
3	关建洪	同济大学医学院免疫学教研室	1	0	0.0	0.0
4	林欣	同济大学医学院免疫学教研室	1	0	0.0	0.0