胚胎的不同处理对兔类ES细胞分离培养的影响

• 作者: 张君涛 张胜军 徐秋勤 曹书郡 李小佳 王新庄 王鸽 高培滨 魏莉莉
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 类胚胎干细胞 分离 培养 胚胎处理 兔
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 903-909
• 页数: 7页
• 字数: 5577字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.07.014

摘要

探讨兔(Lepus brachyurus)胚胎的不同处理方法对兔早期胚胎体外发育能力的影响,筛选出适合兔类胚胎干细胞(embryonic stem,ES)分离培养的兔胚胎的较佳处理方法.将兔胚胎用3种不同的方式进行处理,观察兔类ES细胞贴壁、克隆、生长情况,并对所得的兔类ES细胞进行碱性磷酸酶活性鉴定、干细胞转录因子的RT-PCR检测和体外分化能力的鉴定.结果显示,挑破透明带法和胚胎分割法较对照组得到的胚胎更容易贴壁和增殖,差异显著(P＜0.05),虽然离散胚组的胚胎贴壁率(88.9％)显著高于挑破透明带组(53.8％)(P＜0.05),但挑破透明带组的ICM形成率(48.8％)高于离散胚组(40.0％)(P＜0.05),挑破透明带组F1、F2代兔类ES细胞的克隆率分别为35.7％和33.9％,均显著高于其他两组(P＜0.05),最高传至30代.获得的兔类ES细胞经碱性磷酸酶染色检测呈阳性.提取兔类ES细胞集落的RNA,经RT-PCR检测,得到扩增多能基因GAPDH、Nanog和Sox2与预期大小一致的目的片段.体外分化形成具有3个胚层构成的类胚体(embryoid bodies,EBs).结果表明,挑破透明带有利于提高从兔胚胎中分离胚胎干细胞的效率,能更好的支持兔类ES细胞的培养与增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张君涛	河南农业大学牧医工程学院	44	147	7.0	10.0
2	徐秋勤	河南农业大学牧医工程学院	2	3	1.0	1.0
3	李小佳	河南农业大学牧医工程学院	5	10	2.0	3.0
4	王鸽	河南农业大学牧医工程学院	2	3	1.0	1.0
5	曹书郡	河南农业大学牧医工程学院	2	3	1.0	1.0
6	张胜军	河南农业大学牧医工程学院	2	0	0.0	0.0
7	魏莉莉	河南农业大学牧医工程学院	2	0	0.0	0.0
8	高培滨	河南农业大学牧医工程学院	2	1	1.0	1.0