猪囊尾蚴特异性抗原cC1重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建与鉴定

• 作者: 夏惠 方强 李倩 李江艳 王雪梅 陈勇 陶志勇 骆江坤
• 来源期刊: 中国血吸虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 猪囊尾蚴 cC1 耻垢分枝杆菌 疫苗
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 页码范围: 287-291
• 页数: 5页
• 分类号: R383.3+4
• 字数: 3312字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建表达猪囊尾蚴cC1抗原的重组耻垢分枝杆菌疫苗。方法提取pET28a-cC1质粒DNA，用xho I和BamH I双酶切，用Klenow酶补平xho I酶切末端，同时提取pMV261穿梭质粒载体，用Hind III和BamH I双酶切，用Klenow酶补平Hind III酶切末端，纯化后的酶切产物通过T4连接酶连接，构建pMV261-cC1穿梭质粒，测序验证正确后，将pMV261cC1穿梭质粒经电穿孔法转化耻垢分枝杆菌，构建重组耻垢分枝杆菌，经热诱导后，以猪囊尾蚴病患者血清为一抗进行Western-blotting鉴定。此外，比较正常耻垢分枝杆菌和重组cC1耻垢分枝杆菌生长状态并绘制生长曲线。结果构建的重组穿梭载体经酶切、测序验证正确。构建的重组耻垢分枝杆菌经热诱导后，SDS-PAGE电泳分析显示，在40 kDa处有外源性蛋白表达，与预期值相符。Western-blotting显示其可被猪囊尾蚴病患者血清识别，表明cC1抗原基因在耻垢分枝杆菌中表达成功。重组耻垢分枝杆菌与正常耻垢分枝杆菌的增殖特性无明显差异。结论成功构建了表达猪囊尾蚴特异性抗原cC1的重组耻垢分枝杆菌疫苗。