三氧化二砷联合miR-203对人白血病K562细胞的抑制作用及其机制

• 作者: 何金花 农少云 农朝赞 李育敏 杨林杰 郭凌霄 韦仕喻 韦思羽 黄之虎
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 三氧化二砷 微小RNA-203 白血病 K562细胞 Bcr/abl
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 499-504
• 分类号: R733.7|R730.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2014.05.003

摘要

目的:研究三氧化二砷(As2O3)联合过表达的微小RNA-203(microRNA-203,miR-203)对白血病K562细胞的抑制作用及其可能的分子机制.方法:将miR-203的真核表达载体pmiR-203转染K562细胞,Real-time PCR检测细胞内miR-203的表达.将K562细胞分为空白对照组、As2O3组、pmiR-203组、空质粒对照组、As2O3联合空质粒对照组和As2O3联合pmiR-203组,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术仪检测细胞凋亡率,Western Blotting检测细胞内Bcr/abl蛋白的表达水平.构建Bcr/abl 3'UTR和Bcr/abl mut-3'UTR的双荧光素酶报告基因载体,将其与pmiR-203共转染K562细胞,通过荧光素酶活性分析判断miR-203是否与Bcr/abl基因的3'UTR结合.结果:miR-203的真核表达载体pmiR-203转染K562细胞后,细胞内miR-203的表达水平明显增高(P＜0.05).高表达miR-203联合As2O3使K562细胞对As2O3的敏感性提高到单用As2O3的4.86倍,IC50从3.4μmol/L降低至0.7 μmol/L,两者联用表现为协同作用.As2O3联合pmiR-203组的细胞凋亡率显著高于As2O3联合空质粒对照组[(29.97 ±3.19)％ vs(10.77±1.71)％,P＜0.05].过表达miR-203显著下调K562细胞内Bcr/abl蛋白的表达水平.Bcr/abl 3'UTR中带有明确的miR-203结合位点.结论:miR-203可提高白血病K562细胞对As2O3的敏感性,miR-203和As2O3联用对K562细胞具有协同抑制作用,其作用机制可能与miR-203直接下调Bcr/abl融合基因的表达有关.