发酵床垫料中微生物16S rDNA PCR反应条件的建立与优化

• 作者: 刘标 尹红梅 张德元 杜东霞 王震 许隽 贺月林
• 来源期刊: 农业资源与环境学报
• 关键词: 发酵床垫料 16S rDNA 单因素法 退火温度
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 检测分析方法
• 页码范围: 470-475
• 页数: 6页
• 分类号: Q93-331
• 语种: 中文
• DOI: 10.13254/j.jare.2014.0102

摘要

为探讨发酵床垫料中微生物16S rDNA基因扩增实验中诸多因素对实验结果的影响，采用单因素法对16S rDNA基因扩增时PCR反应体系中的5个潜在因素（Mg2+、dNTP、引物、Taq酶、模板DNA）5水平上进行优化实验，并进一步优化了反应程序中的退火温度、循环次数。结果表明：25μL的最佳反应体系为：10×PCR buffer 2.5μL、MgCl22.0 mmol·L-1、dNTP 0.2 mmol·L-1、引物0.2μmol·L-1、Taq DNA聚合酶0.5 U、模板DNA 50 ng；最佳反应程序为：在94℃下进行4 min预变性；随后循环扩增25个循环（包括94℃变性45 s，53.7℃退火30 s，72℃延伸90 s）；最后在72℃下延伸10 min。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贺月林		60	278	8.0	12.0
2	张德元		23	120	7.0	9.0
3	刘标		29	81	5.0	6.0
4	尹红梅		43	140	6.0	8.0
5	王震		25	94	5.0	7.0
6	杜东霞		19	40	4.0	5.0
7	许隽		17	41	4.0	5.0