基于基因C型鸭甲肝病毒VP1重组蛋白的鸭甲肝病毒抗体ELISA检测方法的建立

• 作者: 岳华 张焕容 杨发龙 汤承 程方明
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 基因C型鸭甲肝病毒 VP1蛋白 间接ELISA 抗体检测
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1148-1153
• 页数: 6页
• 分类号: S855.3|S852.659.6
• 字数: 4043字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.07.017

摘要

以纯化的基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C) VP1重组蛋白作为包被抗原,建立检测DHAV-C抗体的间接ELISA方法.结果表明,试验的最佳条件:用pH9.6、0.05 mol·L 1的碳酸盐缓冲液将包被抗原稀释成5μg·mL 1,4℃包被过夜,抗体稀释度为1∶100,HRP酶标羊抗鸭IgG稀释度为1∶5 000,封闭液为含10％脱脂乳的0.01 mol·L 1 PBS,37℃封闭2h,血清稀释液为含1％BSA的PBS,抗体反应时间为60 min,酶标羊抗鸭IgG反应时间为30 min,底物作用时间为15 min,临界值为OD450nm≥0.474.该方法重复性好,批内变异系数为2.03％～2.95％,批间变异系数为3.28％～7.38％,与鸭圆环病毒(DUCV)、鸭乙型肝炎病毒(DHBV)、鸭瘟病毒(DPV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、鸭抗大肠杆菌、鸭抗金黄色葡萄球菌、鸭抗沙门菌、鸭抗禽多杀性巴氏杆菌以及鸭疫里默杆菌阳性血清无交叉反应,而与基因A型鸭甲肝病毒(DHAV-A)阳性血清有交叉反应,表明该方法可以作为检测DHAV-C和DHAV-A抗体的通用ELISA方法.与中和试验相比,阳性血清检测符合率为80％,阴性血清检测符合率为100％.初步临床应用表明:该方法可用于雏鸭母源抗体和免疫后抗体消长的检测.本研究基于DHAV-C VP1重组蛋白建立的间接ELISA方法可用于基因A型和C型鸭甲型肝炎的血清流行病学调查和抗体检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	岳华	西南民族大学生命科学与技术学院	187	1071	15.0	23.0
3	汤承	西南民族大学生命科学与技术学院	194	1150	15.0	24.0
5	张焕容	西南民族大学生命科学与技术学院	91	312	9.0	13.0
11	杨发龙	西南民族大学生命科学与技术学院	86	520	13.0	18.0
17	程方明	西南民族大学生命科学与技术学院	4	16	3.0	4.0