布鲁氏菌外膜蛋白VirB4在感染胚胎滋养层细胞中的作用分析

• 作者: 刘娟 刘来珍 刘良波 孙志华 张豫 张辉 郭乾 陈创夫 韩玉霞
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 布鲁氏菌 VirB4 cDNA文库 酵母双杂交 mRNA
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: ?论 著?
• 页码范围: 990-996
• 页数: 7页
• 分类号: S855.1
• 字数: 5951字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.10.002

摘要

目的：筛选布鲁氏菌侵染牛胚胎滋养层细胞过程中与Ⅳ型分泌系统VirB4蛋白结合的潜在靶蛋白。方法设计引物并PCR扩增布鲁氏菌的virB4基因，构建表达载体pGBKT7-VirB4，酶切鉴定，测序分析正确后，转化酿酒酵母菌感受态细胞Y187，进行自激活和毒性检测；建立布鲁氏菌侵染牛胚胎滋养层细胞模型，构建布鲁氏菌侵染牛胚胎滋养层细胞cDNA文库；采用酵母双杂交技术筛选与VirB4相互作用的滋养层细胞蛋白，实时定量PCR检测靶蛋白表达量的变化。结果成功构建了pGBKT7-virB4诱饵质粒，转入Y187后无毒性，不能自激活；获得了布鲁氏菌侵染牛胚胎滋养层细胞cDNA文库；筛选到了13个阳性质粒，其中蛋白辅酶Q10和SLC3A2在布鲁氏菌侵染后mRNA表达量均增加。结论本试验对VirB4蛋白与宿主细胞的互作研究为进一步阐明布鲁氏菌感染宿主细胞的发病机制奠定了基础。