人源蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B功能域及其全酶的原核表达及活性比较

• 作者: 庞晓斌 李晓婷 杜冠华 王守宝 谢欣梅
• 来源期刊: 河南大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: PTP1B PTPc 蛋白表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 196-201
• 页数: 6页
• 分类号: Q555+.7
• 字数: 3384字
• 语种: 中文

摘要

通过设计引物,利用RT-PCR从人肝癌细胞(huh-7)中克隆蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)全长及功能域PT-Pc的cDNA序列并连接到pGEM-T Vector载体上,测序正确的cDNA序列连接到表达载体pET-32a(+)上,分别在大肠杆菌Transetta (DE3)和BL21 (DE3)菌株中稳定表达目标蛋白,经Ni2+亲和柱纯化后目的蛋白达到了电泳纯,通过酶促动力学方法分析两种蛋白的体外活性.本实验成功表达了PTP1B和PTPc可溶性蛋白,并发现Transetta (DE3)菌株较BL21(DE3)有更高的蛋白表达能力;酶促动力学分析表明,PTP1B全酶的Vmax为16.13mmol· L-1 ·s-1,Km为0.94 mmol/L;其功能域PTPc的Vmax为5.49 mmol·L-1·s-1,Km为0.54 mmol/L.表明PTP1B全酶的活性高于PTPc功能域的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢欣梅	河南大学药物研究所	27	136	7.0	11.0
2	李晓婷	河南大学药物研究所	12	18	2.0	4.0