草鱼肾细胞电转条件的优化及草鱼呼肠孤病毒NS26蛋白的瞬时表达

• 作者: 吕利群 张娅楠 李炎
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 电转染 草鱼呼肠孤病毒 草鱼肾细胞 重组质粒
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 278-284
• 页数: 7页
• 分类号: S943
• 语种: 中文

摘要

本研究先以pEGFP-N1载体质粒中的绿色荧光蛋白基因为报道基因进行电转实验,优化电压、脉冲时间、质粒添加量和电击次数等电转条件,确立最佳条件.实验表明,细胞密度为1.5×107/mL时,取200 μl在0.2 cm电击杯中进行电击转染,电压为200 V,脉冲时间为45 ms,添加质粒30 μg,电击1次时,转染效果最佳.提取草鱼呼肠孤病毒基因组总RNA,以其逆转录的cDNA作为扩增模板,设计特异引物扩增出GCRV非结构蛋白NS26的基因片段,重组到pEGFP-N1载体上得到重组质粒pEGFP-NS26,将其导入CIK细胞中用电转法高效表达了EGFP-NS26融合蛋白.本研究为进一步研究NS26的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕利群		30	150	7.0	11.0
2	李炎		2	2	1.0	1.0
3	张娅楠		1	0	0.0	0.0