抑制长链非编码RNA-BG对人正常肺上皮细胞系Beas-2B放射敏感性的影响

• 作者: 刘畅 彭超君 徐加英 朱巍 焦旸 王利利
• 来源期刊: 中华放射医学与防护杂志
• 关键词: 长链非编码RNA siRNA 电离辐射 细胞周期 DNA损伤响应
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 放射生物学
• 页码范围: 323-328
• 页数: 6页
• 字数: 4904字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5098.2014.05.002

摘要

目的 探讨长链非编码RNA-BG对人正常肺上皮细胞Beas-2B放射敏感性的影响.方法 设计合成长链非编码RNA-BG的siRNA,通过脂质体介导的转染法转入Beas-2B细胞;采用实时定量PCR法检测干扰后Beas-2B细胞内BG的转录水平.实验分母细胞对照组、对照siRNA转染组和BG-siRNA转染组.采用克隆形成实验检测长链非编码RNA-BG对Beas-2B细胞受照射后增殖活性的影响;流式细胞术检测受照射后细胞周期的改变;通过免疫荧光染色检测电离辐射损伤后细胞内γ-H2AX焦点形成情况.采用Western blot法对DNA损伤相关蛋白(RAD50、磷酸化P53、KU70、KU80、MDM2、CDK2和RB蛋白)进行检测.结果 与对照siRNA转染组细胞相比,分别转染3组BG-siRNA 24 h后,Beas-2B细胞内长链非编码RNA-BG的转录丰度均显著下降(t=8.32～15.29,P＜0.05),后续实验采用干扰效率最高的2号siRNA进行.采用siRNA干扰长链非编码RNA-BG,经0、0.5、1、2、4和6 GyX射线照射后2周,采用多靶单击模型拟合曲线发现,与Beas-2B母细胞对照组和对照siRNA转染组细胞相比,放射增敏比(SER)为0.80和0.82.转染BG-siRNA的Beas-2B细胞经4 Gy X射线照射24 h后,细胞周期G2期比例由对照siRNA转染组的(37.37±0.63)％增至(64.19±1.01)％(t=30.65,P＜0.05);Beas-2B细胞内γ-H2AX焦点数目(59±3.49)/100个细胞较对照siRNA转染组(76±1.78)/100个细胞显著降低(t=13.72,P＜0.05);RAD50蛋白和磷酸化P53蛋白表达较对照siRNA转染组下降;KU70、KU80、MDM2、CDK2和RB蛋白较对照组表达增高.结论 靶向抑制长链非编码RNA-BG可能通过诱导细胞周期阻滞、促进DNA损伤修复,进而调控人正常支气管上皮细胞Beas-2B的放射敏感性.