大鼠Ⅰ型肺泡上皮细胞的分离、培养及生物学特性研究

• 作者: 余静 岳彩黎 曾灵 李勇 杜娟 王海燕 蒋建新
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺泡上皮细胞,Ⅰ型 细胞分离 细胞培养技术
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 374-378
• 分类号: R329.28
• 语种: 中文
• DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.2014.05.09

摘要

目的 改良细胞分离方法,得到高纯度的原代Ⅰ型肺泡上皮细胞(AT Ⅰ)并进行培养,初步观察其生物学特性.方法 采用SPF级SD大鼠,通过酶消化法、IgG贴壁法和免疫磁珠法获得高纯度ATⅠ并进行培养,采用台盼蓝染色计算细胞活力,免疫荧光DAPI法鉴定细胞纯度和表型,倒置显微镜观察细胞生长规律,计数法绘制细胞生长曲线.结果 每只体重120g左右的SD大鼠可获得(2.1±0.5)×106个ATⅠ,细胞活力为93.8％±1.6％,细胞纯度为91.0％±0.6％.培养3d后细胞完全黏附、伸展,培养7d后汇合形成单层扁平状.免疫荧光检测显示,培养的原代细胞水通道蛋白5(AQP5)和小窝蛋白1(Cav-1)呈阳性表达,表面活性蛋白C前体(pro-SPC)呈阴性表达.获取的ATⅠ可在体外增殖,生长曲线显示原代ATⅠ在对数增长期的倍增时间约为66h.结论 改良细胞分离方法可以得到高纯度的ATⅠ,培养后细胞生长良好,可为研究以ATⅠ损伤为特征的肺部疾病提供可靠的体外模型.