抗曲霉硫氧还蛋白还原酶单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 史利宁 廖红 李晓军 李芳秋 胡毓安 陆静芬 马春芳
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 曲霉 硫氧还蛋白还原酶GliT 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 593-596
• 页数: 4页
• 分类号: R446.5
• 字数: 3662字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2014.08.10

摘要

目的 制备烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR) GliT单克隆抗体(单抗)并进行鉴定.方法 取重组烟曲霉TR蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选分泌抗TR抗体的杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化.用ELISA法测定抗体效价,IsoStrip鉴定抗体类、型,用western blot、免疫荧光分析技术和免疫组化染色鉴定单抗的特异性.结果 筛选到1株稳定分泌抗TR单抗(Anti-TR1)的杂交瘤细胞,抗体亚类为IgG1,轻链为κ型.ELISA法测定效价为5×105,能够与烟曲霉分泌蛋白及菌丝中天然TR特异性结合,还可与基因重组TR特异性结合.免疫荧光检测表明,该株单抗与烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉菌丝均发生反应,是曲霉属特异性的抗体.病理组织免疫组化染色结果显示,该抗体可与曲霉菌丝产生特异性反应.结论 获得了1株持续分泌高效价抗曲霉属特异性抗TR单抗的交杂瘤细胞株,为进一步的研究奠定了基础.