植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros的构建及其在草莓上的验证

• 作者: 王华 金万梅
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 植物表达载体 构建 草莓 转基因
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 389-396
• 页数: 8页
• 字数: 6138字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.03.015

摘要

为了研究多基因互作,减少多次转化的不确定性,本研究在花青素合成调节基因del(delila)和ros(rosea1)的上下游分别引入CaMV 35S启动子和rnos终止子,以pBI121-del和pCAMBIA 1301-ros做中间载体,并利用BamH Ⅰ和BglⅡ产生相同4碱基末端的片段,在连接酶的作用下将CaMV 35S启动子分别驱动的del和ros基因构建在同一个植物表达载体pCAMBIA2301上,利用所构建的载体pCAMBIA2301-del-ros通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) LBA4404介导的方法转化草莓(Fragaria ananassa Duch.),并进行PCR检测,获得转基因草莓.通过组织观察发现,转基因草莓的根和叶的颜色变成红紫色;实时RT-PCR分析表明,在转基因草莓中花青素合成的结构基因花色素合成酶(anthocyanidinsynthase,ANS)、查尔酮异构酶(chalcone-flavanone isomerase,CHI)、查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)、二羟黄酮醇-4-还原酶(dihydroflavonol-4-reductase,DFR)、黄烷酮-3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H和类黄酮-3-O-葡糖基转移酶(UDP glucose-flavonoid 3-O-glcosyl-transferase,UFGT)在转基因株系中的表达均上调,这也进一步证实通过该方法构建的植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros可以用来转化植物.本研究结果表明,植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros成功构建,为多基因植物表达载体的构建提供了一种思路,也为在植物体内同时研究多个基因的互作提供借鉴.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金万梅	北京市农林科学院林业果树研究所	34	538	13.0	22.0
2	王华	北京市农林科学院林业果树研究所	9	73	4.0	8.0