转TGEV-S基因玉米中目的基因的PCR检测及优化

• 作者: 周宏专 张晓东 徐福洲 杨兵 王金洛 薛静 覃湘婕
• 来源期刊: 北京农学院学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪传染性胃肠炎病毒 转基因玉米 目的基因 DNA聚合酶 优化
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: S852
• 字数: 4189字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13473/j.cnki.issn.1002-3186.2014.0064

摘要

为提高转基因玉米中目的基因的检出效率,以猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白(TGEV-S)转基因玉米为材料,利用PCR方法检测样品中的目的基因.通过对PCR反应体系中4种不同DNA聚合酶和8种退火温度进行比较,建立和优化了转基因玉米中TGEV-S基因的PCR检测方法.对450株转基因玉米叶片DNA和种子DNA中的TGEV-S基因片段进行检测,并设计33对引物检测插入转基因玉米基因组DNA中的质粒pBAC9020DNA片段.结果显示,LA Taq(R)酶对叶片DNA和种子DNA中TGEV-S片段的PCR扩增敏感性和特异性均优于其他Taq聚合酶,且退火温度为53～55℃时扩增效果较好.分别对450份转基因玉米叶片DNA和种子DNA检测结果显示阳性率分别为82.5％和76.3％.利用33对引物进行的PCR扩增及测序结果显示质粒pBAC9020基因片段已全部插入该玉米基因组DNA中.本试验建立的转TGEV-S基因玉米PCR检测方法敏感性和特异性高,为转基因玉米阳性植株的检测奠定了坚实的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张晓东		37	655	14.0	25.0
2	王金洛		30	236	10.0	14.0
3	杨兵		38	244	9.0	14.0
4	徐福洲		27	211	9.0	13.0
5	周宏专		11	40	3.0	6.0
7	薛静		7	87	3.0	7.0
8	覃湘婕	北京农学院动物科学技术学院	2	0	0.0	0.0