茶树黄烷酮3-羟化酶基因(F3H)的克隆及功能分析

• 作者: 夏涛 王云生 胡晓婧 许玉娇 高丽萍
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 茶树 黄烷酮3-羟化酶(F3H) 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 309-316
• 页数: 8页
• 字数: 5165字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.03.006

摘要

黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)是类黄酮代谢途径中的关键酶.本研究采用逆转录PCR技术,获取了茶树(Camellia sinensis)F3H的开放阅读框(open reading frame,ORF)包含1 107个碱基,编码含有368个氨基酸的蛋白质,推测分子量为41.46 kD,等电点为5.61;实时荧光定量PCR表明,CsF3H在叶片中表达量较高,且受光照影响;将此基因重组到表达载体PRSF上,导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中进行原核表达,优化原核表达的条件,结果表明,最佳诱导温度28℃、异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度1.0 mmol/L、诱导时间5h;利用高效液相色谱法(HPLC)对重组蛋白进行了体外酶活的检测,结果表明,重组目的蛋白具有F3H酶活性,可将反应底物柚皮素(N)和圣草酚(E)分别转化为二氢山奈素(DHK)和二氢槲皮素(DHQ);当E作为底物时,酶活性明显高于柚皮素.本研究结果为茶树F3H酶动力学研究和其器官组织特异性研究提供了基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高丽萍	安徽农业大学生命科学学院	57	747	15.0	25.0
2	王云生	安徽农业大学生命科学学院	29	136	7.0	9.0
6	夏涛	安徽农业大学茶叶生物化学与生物技术重点实验室	95	1588	23.0	35.0
7	胡晓婧	安徽农业大学生命科学学院	1	17	1.0	1.0
8	许玉娇	安徽农业大学生命科学学院	1	17	1.0	1.0