猪圆环病毒2型ORF2基因的优化表达及活性检测

• 作者: 张培君 王宏俊 王雪敏 路明华 路迎迎 龚玉梅
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 ORF2 原核表达 抗原性
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 页码范围: 715-719
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.2
• 语种: 中文

摘要

通过软件分析后,截去猪圆环病毒2型ORF2基因中影响蛋白表达的保守基因,并对其余的基因进行了密码子优化.把改造后的ORF2基因连接到pGEX-4T-1载体上并转入表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达.结果显示,重组菌可以表达出分子质量为50 ku的重组蛋白,在0.2 mmol/L的IPTG诱导5h情况下表达效果最好,表达的蛋白以包涵体形式存在于菌体中.表达产物经琼脂糖凝胶纯化可得到较纯的蛋白.经Western-blot分析,所纯化的蛋白能刺激小鼠产生相应抗体,并能与PCV2阳性血清进行特异性免疫印迹反应.试验结果证实表达的蛋白具有良好的抗原性.