猪链球菌2型主要毒力因子三重荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 刘迎春 孙卫东 张梦 王权 王蓉蓉 蒋蔚 薛俊欣 陈永军
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪链球菌2型 三重荧光定量PCR 毒力因子
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 页码范围: 25-31
• 页数: 7页
• 分类号: S852.616
• 字数: 4500字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中猪链球菌2型三种毒力因子CP2SJ、MRP、EF基因序列，利用Primer Express 3.0软件分别设计3对特异性的引物及相应的Taqman探针。CP2SJ、MRP、EF探针5′端分别标记FAM、HEX、CY5荧光发射基团，3′端标记BHQ1淬灭荧光基团。通过优化反应体系和程序，建立了一种基于Taqman探针法的三重荧光定量PCR，可同时检测上述三种毒力基因。该方法灵敏度高，CP2SJ、MRP、EF的最低检测限分别为90、40、60拷贝数/μL的质粒；特异性强，与其他病原菌无交叉反应；重复性好，变异系数均小于3%。整个检测扩增在60 min内完成。以上结果表明本试验所建立的三重荧光定量PCR方法的敏感性、重复性及特异性均较好，可用于同时快速检测猪链球菌2型三种毒力因子。