Raw264.7细胞向破骨细胞分化诱导培养体系的改良

• 作者: 张舒岩 李冉 李新 李树红 李树蕾 杨立彬 蒋然然 陈治光
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Raw264.7细胞 破骨细胞 巨噬细胞集落刺激因子 核因子κB受体活化因子配体 1.25二羟基维生素D3
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 方法学
• 页码范围: 1114-1118
• 页数: 5页
• 分类号: R494.26|Q813.1
• 字数: 3956字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140540

摘要

目的：通过改良细胞培养方案建立体外诱导 Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞（OC）的高效培养体系。方法：向 Raw264.7细胞培养液α-MEM 中添加50μg · L-1 M-CSF、100μg · L-1 RANKL 和1×10-8 mol·L-11α，25-（OH）2 D3，于5％ CO2、37℃孵箱中培养12 d，每3 d换液1次，每次换液前对细胞进行短暂消化。倒置显微镜下观察细胞形态变化，并利用 HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、FITC-phalloidin染色和免疫荧光染色鉴定 OC是否成熟并具有吞噬功能。结果：通过改良培养方法，在诱导过程中培养孔内的大部分区域始终保持单层细胞的生长状态。镜下观察和 HE染色，诱导第12天时 OC胞体覆盖培养面积的70％；FITC-phalloidin染色，伴随着 OC成熟，伪足内出现的束状伪足小体逐渐变为环形，最终融合带状肌动蛋白环环绕在胞质周围；免疫荧光染色，诱导12 d后 OC表达的降钙素受体（CTR）较前体细胞显著增加， TRAP染色显示 OC胞浆内呈现大量红色颗粒。提示获得的 OC成熟并具有吞噬功能。结论：本实验通过改良培养方法，联合应用细胞因子50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-11α，25-（OH）2 D3建立了体外诱导 Raw264.7细胞分化形成成熟 OC的高效培养体系。