HMGB1基因沉默对氧糖剥夺/复氧所致星形胶质细胞损伤的保护作用

• 作者: 庞月珊 李满 汶海琪 罗勇 谢宸宸 陈瑞芳
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 氧糖剥夺/复氧 星形细胞 HMGB1蛋白 RNA,小分子干扰
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 302-306
• 分类号: R743
• 语种: 中文
• DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.2014.04.10

摘要

目的 探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因沉默对氧糖剥夺/复氧导致的星形胶质细胞损伤的保护作用.方法 将星形胶质细胞分为对照组、模型组、HMGB1 siRNA组、非特异性siRNA组.模型组星形胶质细胞在无糖DMEM培养基、1％O2的培养条件下行2、4、6h的氧糖剥夺后复氧至24h.HMGB1 siRNA组星形胶质细胞在氧糖剥夺/复氧前转染载有HMGB1干扰序列的慢病毒,然后氧糖剥夺6h复氧至24h.采用RT-PCR和Western blotting检测各组星形胶质细胞HMGB1 mRNA及蛋白的表达状况,ELISA法测定星形胶质细胞培养上清液中HMGB1蛋白的浓度变化,并通过乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、MTT法检测星形胶质细胞的损伤情况及存活率.结果 RNA干扰可明显抑制星形胶质细胞HMGB1蛋白的表达(P＜0.01),RT-PCR及ELISA法检测显示,与对照组相比,模型组星形胶质细胞HMGB1 mRNA表达量和细胞培养上清液中HMGB1的浓度均有所增加(P＜0.01),且随着氧糖剥夺时间的延长呈上升趋势(P＜0.01).与对照组相比,模型组星形胶质细胞明显损伤,随着氧糖剥夺时间的延长,星形胶质细胞损伤加重,LDH漏出率逐渐增高(P＜0.01),存活率逐渐下降(P＜0.01);与模型组相比,HMGB1 siRNA组细胞损伤明显减轻,LDH漏出率水平明显下降(P＜0.01),细胞存活率显著上升(P＜0.01).结论 通过RNA干扰技术可抑制星形胶质细胞HMGB1的表达.HMGB1过表达可能是氧糖剥夺/复氧后引起细胞损伤的重要因素之一.