星突江鲽生长激素基因的克隆及体外重组表达分析

• 作者: 史学营 史宝 张凯 徐永江 李存玉 柳学周 臧坤
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 星突江鲽 生长激素 基因克隆 组织表达 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 页码范围: 1230-1242
• 分类号: Q785|S965.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2014.49343

摘要

利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得星突江鲽生长激素基因(GH)的cDNA序列全长为957 bp,其中开放阅读框(ORF)长615 bp,编码204个氨基酸,氨基酸序列与牙鲆同源性最高达到73.0％,系统进化显示,星突江鲽GH与其他鲽形目和鲈形目鱼类聚为一个分支.采用实时荧光定量PCR技术对GH基因的组织表达特性进行了分析,结果显示,GH基因mRNA主要在雌雄成鱼垂体中表达,同时在脑、性腺、肝脏、胃和肌肉中均检测到表达,雌鱼胃和肌肉中GH基因mRNA的表达量显著高于雄鱼(P＜0.05),表明星突江鲽GH可能主要通过旁分泌和自分泌方式参与性别二态性生长调节.本实验成功构建了体外重组表达质粒GH/pET28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导可得N端含6个组氨酸的重组蛋白.重组蛋白主要以大小为24.9 ku的包涵体形式存在,Western-blotting免疫印迹呈阳性.包涵体经6 mol/L盐酸胍变性、Ni2-离子亲和柱纯化和尿素梯度复性后可得纯化GH蛋白;5.4和16.2 μg/mL重组蛋白添加组中,人胚胎肾细胞HEK293T的增殖受到显著抑制.本研究结果可在分子和蛋白水平解析星突江鲽的生长调控机制.