胰酶联合Ⅱ型胶原酶法体外分离培养软骨细胞的分析

• 作者: 史宏灿 陈林松
• 来源期刊: 中国医药
• 学科: 医学
• 关键词: 软骨细胞 气管 原代细胞培养 体外生长
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1522-1525
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4346字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4777.2014.10.034

摘要

目的 通过原代软骨细胞的体外培养和鉴定,探讨胰酶联合Ⅱ型胶原酶法体外分离培养软骨细胞的可行性.方法 分离出兔鼻中隔软骨组织,用胰酶联合Ⅱ型胶原酶的方法进行消化,获取原代软骨细胞.使用倒置显微镜观察软骨细胞的形态及生长情况,并用甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化及免疫荧光染色进行表型鉴定.结果 软骨细胞原代培养形成单层细胞需要7～8d,传代培养时间约2～3 d,细胞以圆形或类上皮细胞形态为主,甲苯胺蓝染色证实细胞可特异性合成糖胺聚糖,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及免疫荧光染色可证实细胞可特异性分泌Ⅱ型胶原.结论 本研究成功建立了简单易行的胰酶联合Ⅱ型胶原酶法体外分离培养大量纯净的软骨细胞,提高了消化速率,加大了细胞释放率,为组织工程气管软骨种子细胞的获取提供重要的技术支撑.