穿膜肽EGFP的构建及其对人成熟精子的穿膜活性鉴定

• 作者: 仇克清 伍琼芳 吴丽萍 孙捷 应志伟 曾韩 陈厚仰 黄志辉
• 来源期刊: 中国男科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞穿膜肽 绿色荧光蛋白 精子
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-13
• 页数: 6页
• 分类号: R321.1
• 字数: 4232字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0848.2014.11.002

摘要

目的：构建穿膜肽TAT与EGFP融合蛋白的原核表达系统，研究该融合蛋白对人成熟精子的穿膜作用和对精子运动参数的影响。方法以pEGFP-N1载体为模板，设计N端和C端含有TAT序列的引物，用PCR技术扩增TAT-EGFP和EGFP-TAT基因，扩增产物插入载体 pET28a，构建成重组质粒pET28a-TAT-EGFP和pET28a-EGFP-TAT。将重组质粒转入大肠杆菌DE3中，IPTG诱导TAT-EGFP和EGFP-TAT融合蛋白表达。表达产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化后SDS-PAGE电泳鉴定。将融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT分别加入正常人精子中孵育，荧光显微镜观察融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT穿膜情况。结果成功构建了高表达重组质粒pET28a-TAT-EGFP和pET28a-EGFP-TAT，纯化了分子质量约为32 kD的融合蛋白 TAT-EGFP和EGFP-TAT。融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT在正常人成熟精子中有穿膜作用。不同浓度的融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT对正常人成熟精子存活率及运动参数无明显影响。结论通过对融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT表达纯化及活性分析，证实穿膜肽TAT在精子中的跨膜转运作用，为将来精子研究提供了实验基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	伍琼芳		110	553	12.0	19.0
2	黄志辉		31	104	5.0	7.0
3	孙捷		10	35	3.0	5.0
4	曾韩		18	83	5.0	8.0
5	应志伟		4	11	2.0	3.0
6	吴丽萍		4	10	2.0	3.0
7	陈厚仰		7	15	2.0	3.0
8	仇克清	南昌大学第三附属医院	2	1	1.0	1.0