穿膜肽-β-葡萄糖苷酶偶联物的制备及活性鉴定

• 作者: 刘云龙 周洁 王光文 王启辉
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 穿膜肽 β-葡萄糖苷酶 偶联物
• 年，卷（期）: 2013,（38）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: R73-36
• 字数: 3962字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2013.38.001

摘要

目的 制备穿膜肽-β-葡萄糖苷酶偶联物并鉴定其穿膜活性和酶活性.方法 采用异型双功能交联剂N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫)-丙酸酯(SPDP)将穿膜肽·增强型绿色荧光蛋白融合蛋白(CPPs-EGFP)、β-葡萄糖苷酶进行共价交联,经Ni-NAT Superflow Cartridge、Sephadex G-75层析柱分离纯化.采用还原型和非还原型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对偶联物进行鉴定；偶联物与膀胱癌EJ细胞共同孵育,置于荧光显微镜下观察,鉴定其穿膜活性；采用β-葡萄糖苷酶测试盒(DBGD-100)鉴定其酶活性.结果 偶联物SDS-PAGE非还原型电泳高分子量端可见明显条带,而还原型电泳分别在穿膜肽和β-葡萄糖苷酶分子量相应位置可见明显条带；在荧光显微镜下与偶联物共同孵育后的膀胱癌EJ细胞内可见明显绿色荧光；用β-葡萄糖苷酶测试盒(DBGD-100)测定,偶联物仍然保持良好的酶活性,约为同等浓度β-葡萄糖苷酶活性的80％.结论 应用SPDP成功制备了穿膜肽-β-葡萄糖苷酶偶联物,并且偶联物保持良好穿膜活性和酶活性.该方法有助于解决酶·前药系统药物难以进入细胞内的问题.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王启辉	广西医科大学基础医学院	28	67	5.0	6.0
2	周洁		24	96	6.0	7.0
3	王光文		2	15	2.0	2.0
4	刘云龙		5	20	3.0	4.0