枯草芽孢杆菌嘌呤合成途径的修饰对腺苷积累的影响

• 作者: 何菊华 刘玥 张成林 徐庆阳 谢希贤 陈宁
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 枯草芽孢杆菌 腺苷 PRPP转酰胺酶 启动子 purF 嘌呤合成途径
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 生理和代谢
• 页码范围: 641-647
• 分类号: Q935
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.2014.06.006

摘要

[目的]研究嘌呤操纵子中purF、purM、purN、purH和PurD基因的共同过表达对枯草芽孢杆菌发酵生产腺苷的影响.[方法]利用温敏质粒pKS1,以单交换的形式增加了purF基因在基因组上的拷贝数,同时将强启动子P43插入嘌呤操纵子中,使嘌呤合成途径中purF基因及其下游purM、purN、purH和purD基因的表达水平得到加强,通过实时定量PCR(Realtime Quantitative PCR,RT-qPCR)测定相关基因(purF、purM、purN、purH和purD)的转录水平;通过酶活性检测分析关键酶基因扩增对PRPP转酰胺酶活性的影响;通过发酵实验考察出发菌株与工程菌株的生长、耗糖和腺苷积累情况.[结果]实时定量PCR结果表明,purF、purM、purN、purH和purD基因的表达水平均有不同程度的提高,嘌呤合成途径中关键酶PRPP转酰胺酶的活性是出发菌株的2.4倍.摇瓶发酵实验发现工程菌腺苷产量较出发菌提高17.5％,糖苷转化率增加26.1％.5L罐发酵实验表明,虽然工程菌的菌体生长受到一定的影响,但在相同发酵周期内腺苷产量比出发菌提高了9.7％.[结论]嘌呤操纵子中purF、purM、purN、purH和purD基因转录水平的增强能够提高腺苷的产量,为通过代谢工程技术改造腺苷生产菌提供了理论依据和研究思路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈宁		229	1535	18.0	25.0
2	谢希贤	天津科技大学生物工程学院代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室	70	359	11.0	14.0
3	徐庆阳	天津科技大学生物工程学院代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室	128	690	13.0	19.0
4	张成林	天津科技大学生物工程学院代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室	21	14	2.0	3.0
5	刘玥	天津科技大学生物工程学院代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室	2	7	2.0	2.0
6	何菊华	天津科技大学生物工程学院代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室	2	7	2.0	2.0