基于假病毒的高通量人类免疫缺陷病毒表型耐药性检测方法的建立和优化

• 作者: 宋爱京 王佑春 聂建辉 许四宏 赵娟 陈晴晴 马建 黄维金
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 人类免疫缺陷病毒 耐药性 表型检测
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 应用技术
• 页码范围: 941-949
• 页数: 9页
• 字数: 8285字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2014.12.009

摘要

目的：建立一种高通量人类免疫缺陷病毒表型耐药性检测方法。方法通过酶切连接方式失活荧光素酶基因，用 LacZ 基因替代原有的蛋白酶和逆转录酶基因。通过 PCR 方法从含耐药基因的 pSG3△env 质粒中扩增 pol 基因，用 infusion 定向克隆技术连接入酶切后的 pNL4-3. Lac，对该表型耐药性检测方法的主要影响因素进行优化。结果构建了用于高通量耐药性检测的 pNL4-3. Lac，确定了检测方法中细胞加入量为10000细胞/孔（96孔板），病毒加入量为200 TCID50/孔， DEAE-dextran 的最佳工作浓度为15μg/ ml。用12种抗病毒药物检测两种假病毒8次，确定方法具有良好的重复性（CV 值在4.32％~28.46％之间）。构建了6种不同的假病毒与基于 pSG3△env 的耐药性检测方法进行比较，两者之间具有良好的一致性。结论基于 pNL4-3. Lac 的表型耐药性检测方法结合了 pSG3△env 和 pNL4-3检测系统的优点，能高通量评价 HIV 病毒对药物的耐受性，可用于感染者耐药性分析和抗病毒药物的筛选。