H5N1禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因在杆状病毒中的共表达

• 作者: 于在江 余慧燕 刘丽琦 舒跃龙
• 来源期刊: 实用预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 禽流感病毒 血凝素 神经氨酸酶 杆状病毒表达系统 共表达
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 543-546
• 页数: 4页
• 分类号: R373.1
• 字数: 3405字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-3110.2014.05.011

摘要

目的 构建共表达H5N1禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白的杆状病毒表达系统.方法 利用PCR方法分别扩增A/Hubei/1/2010(H5N1)病毒的HA和NA基因,克隆至经改造带有对虾白斑综合病毒(wSSv)早期启动子iel的mpFastBac Dual载体,构建mpFast Bac-HA-NA表达质粒,转化DH10Bac感受态细胞,用获得的Bacmid-HA-NA穿梭质粒转染sf9细胞,获得重组杆状病毒Bac-HA-NA;提取重组杆状病毒Bac-HA-NA的DNA并使用PCR方法检测;利用Western blot检测HA和NA表达,并分别检测重组杆状病毒Bac-HA-NA红细胞凝集能力和神经氨酸酶活性.结果 经PCR鉴定,构建的质粒Bacmid-HA-NA正确;Western blot检测表明Bacmid-HA-NA能在sf9细胞中有效表达HA和NA蛋白,生物活性检测表明Bac-HA-NA能引起红细胞凝集并具有神经氨酸酶活性.结论 获得了能同时表达禽流感病毒HA和NA的重组杆状病毒Bac-HA-NA,为进一步研究流感疫苗奠定了基础.