小鼠诺如病毒间接免疫荧光检测方法的建立

• 作者: 佟巍 刘云波 刘先菊 向志光 常慧 张丽芳 李雨函 田胜男 苏静芬
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 间接免疫荧光法 小鼠诺如病毒
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 58-62
• 页数: 5页
• 分类号: R33
• 字数: 3291字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2014.006.013

摘要

目的：建立小鼠诺如病毒（ MNV）的间接免疫荧光试验（ IFA）的检测方法。方法将MNV-1接种RAW264.7细胞，培养36 h收集病毒培养物及未感染细胞培养物，点制抗原玻片；以107 TCID50的MNV-1灌胃接种BALB／c小鼠，收集感染血清做阳性对照血清。收集人工感染后不同时间点的血清样品，以1：10的稀释度使用IFA法测定感染血清MNV抗体滴度。选取80份送检小鼠血清样品，以IFA和ELISA方法测定，差异样品使用Western blot方法进行验证。结果 MNV-1感染RAW264.7细胞（36～48）h，细胞感染率为60％，以36 h感染细胞状态为佳；IFA法测定感染小鼠血清，小鼠感染1周后抗体水平逐渐提高，在4周时抗体滴度达到最高值，之后维持稳定，采集感染4周的动物血清做IFA方法的阳性质控品；80份血清中，IFA法测定阳性27份，阴性53份，ELISA法测定阳性32份，阴性48份；Western blot方法对差异样品验证，其中阳性3份，阴性2份，IFA法和ELISA法检测符合率分别为96.0％和97.5％。结论 IFA方法检测小鼠诺如病毒基本可以反应小鼠的感染情况，偶有假阴性的出现，可以选择IFA方法和ELISA方法作为初筛，差异样品用Western blot方法验证。