PEDVN蛋白单克隆抗体的制备及间接免疫荧光检测方法的建立

• 作者: 何红玲 周如月 周金柱 莫梅君 邝燕齐 郭霄峰
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 单克隆抗体 间接免疫荧光试验
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 页码范围: 27-35
• 页数: 9页
• 分类号: S852.65
• 字数: 5984字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.202002022

摘要

[目的]制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白单克隆抗体,并建立检测PEDV的间接免疫荧光试验方法.[方法]以重组表达的PEDV N蛋白为免疫原,免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,分离高抗体效价小鼠的脾细胞,与SP2/0细胞融合.筛选分泌抗PEDV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株.在已经感染PEDV的Vero细胞中,以抗PEDV N蛋白的单克隆抗体为一抗,FITC?羊抗鼠IgG为二抗,建立PEDV的间接免疫荧光检测方法.[结果]制备的杂交瘤细胞株可以稳定分泌抗PEDV N蛋白抗体,细胞上清液的ELISA抗体效价在1:3200以上,而诱导的小鼠腹水抗体效价在1:1000000以上.将单克隆抗体应用在间接免疫荧光试验时,最适条件为?20℃80％(φ)丙酮溶液中固定30 min;一抗用PBS缓冲液按体积比1:1000稀释,4℃ 条件下过夜孵育;二抗用PBS缓冲液按体积比1:100稀释,37℃ 条件下孵育1 h.以建立的间接免疫荧光试验方法检测细胞中的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PPRV)、猪肠道 α 冠状病毒(PEAV)、猪轮状病毒(PoRV)和PEDV,只有PEDV显示阳性,其他病毒均为阴性.[结论]制备了抗PEDV N蛋白单克隆抗体,以该抗体为一抗建立检测PEDV的间接免疫荧光试验方法具有良好的特异性,为PEDV的实验室检测及PEDV在培养细胞中的定位和动态分布提供了有效的手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭霄峰	华南农业大学兽医学院	84	745	16.0	24.0
2	邝燕齐	华南农业大学兽医学院	1	0	0.0	0.0
3	莫梅君	华南农业大学兽医学院	2	1	1.0	1.0
4	何红玲	华南农业大学兽医学院	1	0	0.0	0.0
5	周金柱	江苏省农业科学院兽医研究所	1	0	0.0	0.0
6	周如月	华南农业大学兽医学院	1	0	0.0	0.0