苏云金芽胞杆菌WB5中营养期杀虫蛋白3Aa基因（vip3Aa）的克隆、表达与纯化

• 作者: 关雄 宋飞飞 石鹏 陈凡冰 黄志鹏
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 苏云金芽胞杆菌 营养期杀虫蛋白3Aa基因(vip3Aa) 克隆与表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1388-1393
• 页数: 6页
• 字数: 3394字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.11.008

摘要

营养期杀虫蛋白(vegetative insectcidal protein, Vip)是由苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)在营养生长指数中期至稳定期期间分泌产生的一类新型杀虫因子，分为Vip1、Vip2和Vip3三种，以Vip3的研究最为深入。Vip3A对鳞翅目(Lepidoptera)害虫具有广谱杀虫活性，具有重要研究意义。本研究以BtWB5菌株总DNA为模板，采用PCR方法扩增vip3Aa(GenBank登录号：AAM22456)全长，将该片段纯化回收后与pMD18-T连接并转入大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α，进行酶切验证和序列测定。将vip3Aa基因片段与经同样酶切的表达载体pCzn1连接，构建重组表达载体pCzn1-vip3Aa，转入大肠杆菌ArcticExpressTM (DE3)，异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)进行诱导表达。SDS-PAGE结果表明，在沉淀和上清中均有约88 kD VIP3Aa蛋白质表达产物；采用Ni亲和树脂对上清中的VIP3Aa融合表达蛋白进行了纯化，获得了纯化蛋白。本研究成功亚克隆了vip3Aa基因，并表达纯化了VIP3Aa蛋白，为后续研究VIP3Aa蛋白在昆虫中肠的作用受体提供了基础资料。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄志鹏	福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室	21	111	6.0	9.0
2	关雄	福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室	112	2066	21.0	43.0
3	陈凡冰	福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室	3	4	1.0	2.0
4	宋飞飞	福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室	2	4	1.0	2.0
5	石鹏	福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室	2	4	1.0	2.0