苏云金芽胞杆菌NBIC-380菌株营养期杀虫蛋白3Aa基因(vip3Aa)在大肠杆菌及芽胞杆菌中的表达

• 作者: 余晓娇 刘晓艳 杨自文
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 枯草芽胞杆菌 营养期杀虫蛋白(Vip) vip3Aa基因 克隆与表达
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1465-1471
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.11.009

摘要

营养期杀虫蛋白3A(vegetative insecticidal protein 3A,Vip3A)对鳞翅目(Lepidoptera)害虫具有广谱杀虫活性,具有重要研究意义.本研究以对玉米螟(Ostrinia nubilalis)具有高毒力的野生型苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringienesis,Bt) NBIC-380菌株总DNA为模板,PCR扩增vip3Aa (GenBank登录号:KT307982)全长基因约2.4 kb.将vip3Aa基因插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pGEX-6p-1和pET-28a以及Bt表达载体pBMB1A中,构建重组表达载体pGV3、pEV3和pBV3.将pGV3和pEV3转化大肠杆菌BL21 (DE3),pBV3转化BtBMB171和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis,Bs)168菌株.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)分析表明,vip3Aa基因在BL21(DE3)、BtBMB171和Bs168中均有表达,蛋白质相对分子质量为88kD.纯化后的蛋白及Bt中表达的蛋白对棉铃虫(Helicoverpa armigera)二龄幼虫进行了生物测定,在大肠杆菌表达的蛋白没有杀虫活性,而在芽胞杆菌中表达的蛋白有杀虫活性,半数致死浓度(medium lethal concentration,LC50)值分别为6.185 6 (BtBMB171)和2.984 6 mg/mL (Bs168).生测结果表明,BtNBIC-380菌株的vip3Aa基因表达的蛋白对棉龄虫具有一定杀虫活性.本研究为丰富Vip的基础研究和构建高效广谱的工程菌提供基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨自文	武汉大学生命科学学院	25	164	7.0	11.0
3	刘晓艳		11	23	3.0	4.0
6	余晓娇	武汉大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0