组蛋白乙酰化/去乙酰化失衡对C2C12肌原细胞成肌分化的影响

• 作者: 华益民 周开宇 方婕 朱琦 李一飞 母得志 王川 詹雅兰
• 来源期刊: 中华妇幼临床医学杂志（电子版）
• 关键词: 组蛋白乙酰转移酶 组蛋白脱乙酰基酶 细胞分化 丙戊酸
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 601-608
• 页数: 8页
• 字数: 6257字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.1673-5250.2014.05.009

摘要

目的探讨组蛋白乙酰化/去乙酰化在 C2C12肌细胞分化过程中的作用。方法选择C2C12肌原细胞为研究对象,按照培养基及干预条件的不同,将其分为对照组、马血清诱导分化组、1 mmol/L丙戊酸(VPA)组、2 mmol/L VPA 组、4 mmol/L VPA 组及8 mmol/L VPA 组,每组样品数为6个,其培养基内分别含10%胎牛血清、2%马血清、2%马血清+1 mmol/L VPA、2%马血清+2 mmol/L VPA、2%马血清+4 mmol/L VPA及2%马血清+8 mmol/L VPA。比较不同浓度 VPA组与马血清诱导分化组肌小管分化率差异。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)与 Western 蛋白质印迹法(Western blotting)检测肌相关蛋白[包括肌球蛋白(Myosin)、肌钙蛋白(Troponin)I-SS、成肌细胞分化(Myod)1蛋白]和组蛋白去乙酰化酶(HDAC,包括 HDAC1,2,3)在 C2C12细胞分化过程中及使用不同浓度VPA干预C2C12细胞分化过程中的转录及蛋白表达水平,并比较其表达水平差异。结果本研究结果为：①马血清诱导分化组较对照组的肌相关蛋白mRNA和蛋白表达水平均显著升高,且差异有统计学意义(P<0.01)；而 HDAC mRNA 和蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。②各浓度 VPA 组肌小管分化率分别较马血清诱导分化组显著下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。③4 mmol/L VPA组及8 mmol/L VPA组肌相关蛋白及 HDAC mRNA和蛋白表达水平分别较马血清诱导分化组显著下降,且差异有统计学意义(P<0.05)；④给予 VPA 干预后,不同浓度 VPA 组 C2C12细胞的 Myosin、Troponin I-SS、Myod1、HDAC1,2,3的mRNA及蛋白表达水平均呈浓度依赖性,随着 VPA 浓度增加,表达水平逐步下降(r=-0.92,-0.89,-0.93,-0.84,-0.93,-0.97；r=-0.99,-0.86,-0.92,-0.95,-0.91,-0.96；均为P<0.05)。结论组蛋白乙酰化/去乙酰化在 C2C12肌原细胞成肌分化过程中具有重要意义,HDAC表达抑制可导致肌相关蛋白表达水平下降,进而抑制成肌分化。