细粒棘球绦虫GAPDH蛋白的生物信息学分析及其重组表达纯化和酶活性检测

• 作者: 吕刚 吴巨龙 孙萃萍 景涛 王绚 苏娟 逯召莲
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细粒棘球绦虫 甘油醛3-磷酸脱氢酶 生物信息学 原核表达 酶活性检测
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 125-129
• 页数: 5页
• 分类号: R383.3
• 字数: 3344字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.02.004

摘要

目的 以生物信息学预测细粒棘球绦虫甘油醛3-磷酸脱氢酶(EgGAPDH)编码基因及其编码蛋白的结构和功能,利用大肠杆菌原核表达系统高效表达EgGAPDH重组蛋白,体外检测其酶活性.方法 运用各软件对EgGAPDH的理化性质、保守功能域、系统发生树和二级结构、三级结构等方面进行分析后,将EgGAPDH基因亚克隆于表达载体pET30a(+),转化入E.coli BL21(DE3)感受态细菌,表达、纯化重组蛋白,并利用底物3-磷酸甘油醛测定重组蛋白EgGAPDH的酶催化活性.结果 EgGAPDH cDNA序列长度为1 011 bp,编码一个336个氨基酸的蛋白.该GAPDH蛋白理论相对分子质量为36 128.3 Da,等电点为8.44,具有GAPDH蛋白家族的两个功能结构域,富含6种类型的特定功能位点.成功构建的原核表达载体pET30a(+)-EgGAPDH在E.coli BL21(DE3)中高效表达,且发现表达产物主要以可溶形式分布于裂解上清,制备甘油醛3-磷酸脱氢酶纯品并通过酶活检测显示其具有高效酶活性.结论 EgGAPDH基因可在原核系统中获得有酶催化活性的高效表达,为进一步研究其在糖代谢中的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕刚	海南医学院寄生虫学教研室	54	174	6.0	10.0
2	景涛	兰州大学基础医学院病原生物学研究所	41	258	10.0	13.0
6	逯召莲	兰州大学基础医学院病原生物学研究所	4	2	1.0	1.0
7	王绚	兰州大学基础医学院病原生物学研究所	2	3	1.0	1.0
8	吴巨龙	兰州大学基础医学院病原生物学研究所	1	1	1.0	1.0
9	苏娟	兰州大学基础医学院病原生物学研究所	1	1	1.0	1.0
10	孙萃萍	兰州大学基础医学院病原生物学研究所	1	1	1.0	1.0