基于rDNA-ITS和大亚基的甘蔗凤梨病菌分子鉴定及序列分析

• 作者: 周主贵 商显坤 林善海 潘雪红 魏吉利 黄诚华
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 奇异长喙壳菌复合群 形态特征 rDNA-ITS 大亚基 遗传分析
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 2103-2109
• 页数: 7页
• 分类号: S566.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.12.2103

摘要

[目的]分析甘蔗凤梨病菌[Ceratocystis paradoxa(de Seynes) Moreau]核酸rDNA-ITS和大亚基区域序列,为甘蔗凤梨病菌的快速、有效分子检测提供技术支持.[方法]从发生凤梨病的新台糖22号(ROC22)地下种茎分离获得1株菌株FL-1,根据柯赫氏法则测定其致病性;将该病菌在PDA培养基进行培养,观察其菌落形态特征,并在光学显微镜下观察分生孢子梗、厚垣孢子、分生孢子的形态特征.用引物ITS1/4和NL1/4分别对该菌株的核酸rDNA-ITS和大亚基序列进行扩增,以MEGA软件的Neighor-joining方法分别构建系统发育树,并用p-distance进行遗传距离分析.[结果]分离菌株FL-1为甘蔗凤梨病致病菌,具有典型的节孢子和厚垣孢子,形态特征与奇异长喙壳菌(Cparadoxa)一致.从菌株FL-1基因组DNA中分别扩增获得499 bp rDNA-ITS和563 bp大亚基片段,其序列均与C.paradoxa其他菌株的同源性为100.0％.系统聚类分析结果表明,两条序列均与C.paradoxa聚为一个独立簇.遗传矩阵分析结果表明,rDNA-ITS和大亚基均与C.paradoxa聚合在一起,种内遗传距离分别为0～0.017和0～0.008,而Ceratocystis属内种间遗传距离分别为0.015～0.106和0.002～0.059.结合分子检测结果和形态学特征,将FL-1鉴定为C.paradoxa.[结论]来自甘蔗的FL-1菌株是C.paradoxa复合群的成员,并被划分在进化复合群的分枝1上.rDNA-ITS和大亚基适合用于甘蔗凤梨病的PCR检测及分子标记.