基于iTRAQ技术的水牛卵泡液蛋白质样品预处理的优化

• 作者: 付强 周洁 胡炜
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 水牛卵泡液 蛋白质样品制备 沉淀剂 酶解 iTRAQ标记 优化
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 2046-2051
• 页数: 6页
• 分类号: Q51
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2014.11.2046

摘要

[目的]优化水牛卵泡液蛋白质差异表达样品制备程序,为相对和绝对定量同位素标签(iTRAQ)技术在蛋白质差异表达分析中的应用奠定基础.[方法]在蛋白质样品溶液酶解过程中,选择两种不同沉淀剂沉淀蛋白质,分别比较蛋白质酶解、iTRAQ标记反应和多肽色谱分离的效果;在纳升液相色谱(nano-LC)分离样品前用快速分离小柱进行处理,鉴定色谱分离效果,以确定蛋白质样品预处理的优化程序.[结果]相对于丙酮,使用含0.1％乙酸的丙酮—乙醇混合液(1∶1)作为沉淀剂可获得较好的蛋白质沉淀效果,蛋白沉淀为白色,蛋白质浓度为5.76μg/μL.相对于蛋白质溶液在还原烷基化后直接使用胰蛋白酶酶解,在酶解前沉淀蛋白质溶液可使蛋白样品的酶解效率更高,获得的肽段峰更丰富、峰值更高;可使多肽和iTRAQ试剂间产生有效的标记反应,母离子具有较高的碎裂效率,获得的二级碎片峰更丰富,iTRAQ试剂的特征报告离子116 m/z较117 m/z的谱图强,辨识度高;获得的多肽nano-LC分离色谱峰更丰富,峰值和分辨率更高.相对于直接进行LC分离,在nano-LC分离前用快速分离小柱对多肽溶液进行杂质处理,也可获得丰富的多肽nano-LC色谱峰,且峰值和分辨率较高.[结论]在iTRAQ试剂标记、蛋白质液相分离和差异分析前,使用适宜的沉淀剂处理蛋白质溶液,并以快速分离小柱除去多肽混合液小分子杂质,可使质谱获得更准确的鉴定结果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付强		36	93	5.0	8.0
3	胡炜		14	68	6.0	8.0
7	周洁		14	62	4.0	7.0