新型人工miRNA表达框架的构建及其有效性验证

• 作者: 张旺 彭剑雄 徐慧 杨伦宇 范张玲
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人工miRNA表达框架 EGFP基因 HepG2细胞 HeLa细胞 A549细胞
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 939-943
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 4443字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2014.12.19

摘要

目的 构建针对EGFP基因的人工miRNA表达框架并验证其有效性.方法 用融合PCR技术在体外构建针对EGFP基因的人工miRNA表达框架.经测序比对后,以该表达框架与报告基因质粒pEGFP-N2分别共转染人肝癌细胞系HepG2、人宫颈癌细胞系HeLa和人肺腺癌细胞系A549,48 h后用倒置荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况并用流式细胞仪定量检测其抑制效率.结果 构建的人工miRNA表达框架经测序比对正确;共转染该表达框架和报告基因质粒pEGFP-N2后,倒置荧光显微镜观察结果显示,3种细胞中发出荧光的细胞数量减少,荧光强度明显降低.流式细胞术检测结果显示,HepG2细胞、HeLa细胞和A549细胞中共转染组和单独转染组的细胞荧光表达率差异均有统计学意义(t分别为20.80、30.35和20.34,P均＜0.01).结论 成功构建靶向EGFP的人工miRNA表达框架,且此表达框架能有效而特异地抑制EGFP蛋白在HepG2细胞、HeLa细胞和肺癌A549细胞中的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐慧	中南大学湘雅医学院医学检验系	100	517	10.0	17.0
2	彭剑雄	中南大学湘雅医学院医学检验系	27	57	4.0	6.0
3	张旺	中南大学湘雅医学院医学检验系	5	22	3.0	4.0
4	范张玲	中南大学湘雅医学院医学检验系	2	3	1.0	1.0
5	杨伦宇	中南大学湘雅医学院医学检验系	1	2	1.0	1.0