恒河猴 p53基因沉默靶点在细胞水平的验证

• 作者: LIU Yun-bo SHI Gui-ying SHI Liang 佟巍 刘先菊 向志光 张晨 李雨函 苏静芬
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因沉默 p53 基因 恒河猴
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 7-10
• 页数: 4页
• 分类号: R33
• 字数: 2761字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969.j.issn.1671.7856.2014.008.002

摘要

目的：为建立恒河猴 p53基因沉默模型，首先在细胞水平筛选和测定恒河猴 p53基因有效沉默靶点。方法测定非洲绿猴肾来源成纤维细胞 COS-7中 p53基因的表达水平；对恒河猴 p53基因做生物信息学分析，优选靶序列设计 shRNA，克隆入慢病毒载体 FUGW-TDT，转染 COS-7细胞，以 real-time PCR 检测 p53 mRNA 抑制水平，以 Western blot 检测 p53蛋白水平表达变化。结果在 COS-7细胞检测到 p53基因的表达；生物信息学筛选到3个靶片段，分别位于 p53 mRNA 的238～258 bp，681～701 bp，169～189bp，均在开放阅读框内； p53三个靶位点的沉默效率在 mRNA 水平分别为（87.17±4.03）％，（72.62±4.11）％，（76.22±0.98）％；在蛋白水平的沉默效率分别为（84.44±2.18）％，（71.04±1.18）％，（74.17±0.95）％。结论在细胞水平筛选得到3个有效的 p53基因沉默靶点，可用于后续的恒河猴基因沉默研究。