狨猴B2m基因沉默位点在细胞水平的验证

• 作者: 刘云波 向志光 张晨 滕永康 邓怡晨
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因沉默 狨猴 β2-微球蛋白 短发夹RNA
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 37-41
• 页数: 5页
• 分类号: R-33
• 字数: 3219字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.05.010

摘要

目的 在细胞水平筛选狨猴B2m基因的有效沉默靶点,并进行验证.方法 查询人源B2m验证过的有效siRNA靶位点序列,与狨猴B2m基因序列进行同源性比较,选择匹配靶点合成shRNA序列.将体外合成的2条干扰序列分别与慢病毒载体 FUGW-TDT连接,构建FUGW-TDT-shb2m干扰表达质粒,在聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导下转染293T细胞,转染后48h,用实时荧光定量法检测转染细胞中B2m基因mRNA的水平.结果 筛选出2个与狨猴完全同源的B2m沉默靶位点,分别位于B2m mRNA 的290~310 bp,665~685 bp;B2m两个靶点在转录水平的沉默效率分别为(46.54±7.91)%(P < 0.05)和(83.22±4.37)%(P < 0.0001),差异有显著性.结论 成功构建成FUGW-TDT-shb2m重组质粒;在细胞水平筛选得到2个有效的B2m基因沉默靶点;为后续有关介导狨猴B2m基因沉默的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘云波	中国医学科学院医学实验动物研究所	45	391	9.0	19.0
2	向志光	中国医学科学院医学实验动物研究所	25	50	4.0	5.0
3	滕永康	中国医学科学院医学实验动物研究所	6	5	1.0	1.0
4	邓怡晨	中国医学科学院医学实验动物研究所	2	2	1.0	1.0
5	张晨		1	1	1.0	1.0