成年狨猴肾脏细胞体外培养体系的建立及CRISPR/Cas9基因编辑的应用

• 作者: 丛日旭 佟巍 刘云波 刘先菊 向志光 张丽芳 郭智 阮研硕
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 狨猴 肾脏细胞培养 Cas9基因编辑
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 50-54
• 页数: 5页
• 分类号: R-33
• 字数: 4289字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2019.08.008

摘要

目的 建立成年狨猴肾脏细胞体外培养的培养体系,并将Cas9编辑系统初步应用于所培养的狨猴肾脏细胞,建立检测sgRNA切割活性的体系.方法 取成年的狨猴肾脏,采用贴壁法、消化法得到狨猴肾脏细胞.对细胞进行生长曲线测定、转染试剂(Viafect和Lipo2000)及抗性(嘌呤霉素和杀稻瘟菌素)浓度筛选,将SIRT1的sgRNA质粒和Cas9质粒共转染狨猴细胞,提取基因组并对基因修饰目的片段扩增,并将扩增产物进行测序.结果 建立狨猴肾脏细胞体外培养体系;ViaFect转染试剂转染率大于60％;细胞抗性筛选适宜浓度嘌呤霉素4μg/mL,杀稻瘟菌素8μg/mL;测序结果表明,从sgRNA的PAM序列附近开始出现突变峰,证明sgRNA成功引入突变.结论 成功建立了狨猴肾脏细胞的体外培养、细胞转染和抗性筛选体系;CRISPR/Cas9可以用于狨猴肾脏细胞编辑,为基因修饰狨猴靶点选择提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘先菊	中国医学科学院医学实验动物研究所	17	55	5.0	6.0
2	佟巍	中国医学科学院医学实验动物研究所	17	42	3.0	5.0
3	张丽芳	中国医学科学院医学实验动物研究所	23	120	7.0	9.0
4	阮研硕	中国医学科学院医学实验动物研究所	8	22	3.0	4.0
5	郭智	中国医学科学院医学实验动物研究所	8	28	2.0	5.0
6	向志光	中国医学科学院医学实验动物研究所	25	50	4.0	5.0
7	丛日旭	中国医学科学院医学实验动物研究所	6	4	1.0	1.0