利用Cas9 RNP技术制备B2M和PD-1高效率双基因敲除的人原代T淋巴细胞

• 作者: 付烊 徐娅 朱诗聪 章必成
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: Cas9 核糖核蛋白 PD-1 β2-微球蛋白 T淋巴细胞
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 403-410
• 页数: 8页
• 分类号: R392.12
• 字数: 6529字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2020.19.1603

摘要

目的 观察Cas9 RNP技术制备B2M和PD-1双基因敲除的人原代T淋巴细胞(以下简称T细胞)的效率.方法 设计单向导RNA(sgRNA)后克隆至载体质粒,经转染HEK293T细胞后筛选出高效率的sgRNA;先后构建B2M及PD-1单基因敲除及同时敲除双基因的T细胞,分别通过Sanger测序、TA克隆及流式细胞术等方法验证编辑效率.结果 成功构建包含sgRNA的载体质粒并经初筛获得高效率的B2M sgRNA1及PD-1 sgRNA1;在T细胞中验证B2M和PD-1单基因敲除效率均高达90％;构建双基因敲除T细胞后经验证基因层面的编辑效率高达90％,B2M及PD-1蛋白的表达下调率分别达86％、89％.结论 利用Cas9 RNP技术可制备B2M和PD-1高效率双基因敲除的T细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付烊	湖北中医药大学附属襄阳医院肿瘤科	19	52	4.0	6.0
2	徐娅	武汉科技大学医学院	3	0	0.0	0.0
3	朱诗聪	武汉大学人民医院肿瘤中心	1	0	0.0	0.0
4	章必成	武汉大学人民医院肿瘤中心	13	24	3.0	4.0