基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体的构建及应用

• 作者: 刘羽 李伊培 潘芸 胡显文 邵勇 陈惠鹏 高丽华 高招刚
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 谷氨酰胺合成酶 甲氨喋呤 蛋氨酸亚氨基代砜 巨细胞病毒 高效表达细胞系 重组蛋白质类
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 807-810
• 页数: 4页
• 分类号: Q2
• 字数: 3294字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2014.10.015

摘要

目的：通过插入GS筛选系统和替换启动子改造载体以获得高效表达细胞系。方法将pIRES2-EGFP多克隆位点上的BamHⅠ位点突变，构建一个新的载体pIRES2-EGFP-B，通过AseⅠ和NheⅠ双酶切其上的巨细胞病毒（CMV）启动子，加入谷氨酰胺合成酶（ GS）基因筛选标志，再通过PacⅠ和NheⅠ双酶切，插入人巨细胞病毒（hCMV）启动子，构建载体pHGS1．0。将目的基因分别插入载体pHGS1．0和pIRES2-EGFP中，通过比较重组蛋白TEM8（1-227）-VEGFR1domain2-IgG2（TV-IgG2）表达来分析新构建载体的优越性。结果成功插入GS筛选标志，并加入hCMV启动子，人免疫球蛋白定量试剂盒分析发现，重组蛋白表达量提高了5倍。结论通过GS系统筛选，得到高效表达目的蛋白载体系统，为后续的高效表达细胞系筛选奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈惠鹏	军事医学科学院生物工程研究所	143	885	15.0	23.0
2	高丽华	军事医学科学院生物工程研究所	37	174	7.0	12.0
3	胡显文	军事医学科学院生物工程研究所	67	596	13.0	22.0
4	潘芸	安徽大学生命科学学院	3	4	1.0	1.0
5	邵勇	军事医学科学院生物工程研究所	15	22	3.0	4.0
6	高招刚	安徽大学生命科学学院	3	4	1.0	1.0
7	李伊培	沈阳药科大学生命科学学院	2	3	1.0	1.0
8	刘羽	军事医学科学院生物工程研究所	3	1	1.0	1.0