慢病毒介导人PERK基因修饰对内质网应激介导凋亡的影响

• 作者: 夏飞 张鹏 李美玲 郭风劲 韩晓凤
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: PERK 慢病毒 成肌细胞 内质网应激 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1183-1190
• 分类号: R349.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1008.2014.01183

摘要

目的 构建人蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)慢病毒载体并包装慢病毒颗粒(lentivirus),探讨成肌细胞C2C12中PERK基因慢病毒修饰对内质网应激介导凋亡的作用.方法 设计并合成人PERK基因的上、下游引物,采用PCR方法从真核质粒pcDNA3.1(-)-PERK中扩增目的基因.鉴定后与慢病毒载体pWPT-GFP进行重组,再将重组慢病毒载体pWPT-GFP-PERK与慢病毒包装质粒pMD2G、pSPAX2共转入293T细胞中,进一步包装形成PERK慢病毒(LV-PERK);收集转染后48 h的细胞上清,体外感染成肌细胞C2C12,观察绿色荧光蛋白(GFP)感染效率,并应用流式细胞仪(FCM)检测内质网应激时重组慢病毒PERK对C2C12细胞增殖凋亡的影响,蛋白质印迹法检测凋亡相关基因Cleaved Caspase-3与Chop蛋白的表达.结果 成功构建和包装了滴度为4.2×108 efu /mL的PERK重组慢病毒.FCM检测结果表明,TM+LV-PERK处理组G1期细胞比例为54.37％,低于TM组(77.91％)和LV-GFP组(66.41％);TM+ LV-PERK处理组S期细胞比例为31.36％,高于TM组(12.14％)和LV-GFP组(16.96％),各组差异均具有统计学意义(P＜0.05);此外,TM+ LV-PERK处理组细胞凋亡率为25.91％,高于TM组(11.79％)和Ad-GFP组(11.24％),各组差异具有统计学意义(P＜0.05).免疫印迹检测Cleaved Caspase-3和Chop蛋白的表达与FCM结果一致.结论 成功构建和包装LV-PERK重组慢病毒颗粒,在内质网应激时,LV PERK慢病毒可促进C2C12细胞的增殖和凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭风劲	重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室	36	142	7.0	11.0
2	李美玲	重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室	7	50	1.0	7.0
3	张鹏	重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室	16	58	4.0	7.0