一种高效提取普通小球藻叶绿体DNA的新方法

• 作者: 孙雪飘 弓淑芬 张家明 许夏冰 谭德冠
• 来源期刊: 植物生理学报
• 关键词: 普通小球藻 叶绿体DNA 尿素 月桂酰肌氨酸钠 percoll分离液
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 880-884
• 页数: 5页
• 语种: 中文

摘要

本文采用尿素-月桂酰肌氨酸钠(urea-sarkosyl)法,用于分离带有坚硬细胞壁小球藻的高纯度叶绿体DNA (cpDNA)。将对数生长期的小球藻收集后置于冰上研磨, percoll密度梯度离心收集叶绿体层,显微观察表明叶绿体经梯度离心后形态完整。采用尿素-月桂酰肌氨酸钠法、蛋白酶K消化及酚/氯仿/异戊醇抽提,获得了高纯度的cpDNA。检测结果显示, cpDNA分子长度为22 kb, A260：A280值为1.87±0.01,产率达(2.52±0.01)μg·g-1(DW)；cpDNA编码的16S rDNA扩增呈阳性,而由细胞核编码的18S rDNA扩增呈阴性。表明cpDNA纯度高,没有受到核基因组DNA的污染,符合小球藻cpDNA高通量测序的要求。同时,该方法也适合提取具有相似细胞壁成分的其他微藻的基因组DNA和cpDNA。