美洲型与欧洲型PRRSV多重TaqMan荧光定量RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用

• 作者: 官家明 张步娴 施开创 李军 李凤梅 邹联斌 陈汉忠
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型毒株 欧洲型毒株 多重TaqMan荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 页码范围: 412-418
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型经典毒株、高致病性变异毒株以及欧洲型毒株基因组的序列差异,设计2对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分PRRSV美洲型经典毒株、变异毒株以及欧洲型毒株的多重荧光定量RT-PCR方法.该方法线性关系好,标准曲线的相关系数均达到0.999以上;特异性强,只有PRRSV出现阳性反应,而与口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型均无交叉反应;敏感性高,经典毒株、变异毒株、欧洲型毒株的检出下限分别为1.13、1.37、1.39 copies/μL,均比普通RT-PCR敏感100倍;重复性好,组内及组间变异系数均小于1.5％.应用所建立的方法对采集的282份临床病料进行检测,结果PRRSV阳性101份,其中95份为变异毒株、6份为经典毒株、4份为变异毒株和经典毒株混合感染,未检测到欧洲型毒株.结果表明,本研究建立的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法可为PRRSV的快速鉴别诊断及流行病学调查提供有效的技术手段.