hsa-microRNA-218对颗粒溶素表达影响的探讨

• 作者: 何永林 冯鑫 张春燕 张璐渝 徐蕾 杨春 杨静 樊宇 穆柳青
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 颗粒溶素 293 T细胞 RNA干扰 激光共聚焦
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 596-599
• 页数: 4页
• 分类号: R378.91+1
• 字数: 3512字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.05.005

摘要

目的：探讨hsa-microRNA-218（hsa-mir-218）对颗粒溶素（Granulysin，GLS）表达的影响。方法：抽提佛波酯（ Phorbol 12-myristate 13-acetatefor ， PMA）激活的THP-1细胞的总RNA，逆转录后PCR扩增GLS基因，将其克隆至pDsRed-Ex-press-C1，构建GLS表达质粒pDsRed-GLS。将pDsRed-GLS与pGenesil-mir-218（pGenesil-mir-control）共转染293T细胞，36 h后激光共聚焦显微镜观察两种质粒在细胞中的表达情况，48 h后提取细胞总RNA和蛋白，RT-PCR和Western blot检测hsa-mir-218对GLS表达的影响。结果：酶切和测序结果证实重组质粒pDsRed-GLS构建成功，且能与microRNA干扰质粒在293T细胞中共表达。与转染pGenesil-mir-control组细胞相比，Western blot 结果显示转染pGenesil-mir-218组细胞GLS蛋白表达下降约50％，而GLS mRNA表达无明显变化。结论：hsa-mir-218在转录后水平干扰了GLS的表达，为进一步探讨mir-218干扰GLS表达的机制打下基础。