颗粒溶素的克隆表达及活性分析

• 作者: 兰喜 居军 徐向红 柳纪省 王晚霞
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: 颗粒溶素 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 75-79
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3086字
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆人颗粒溶素基因并进行原核表达.方法 体外分离并培养外周血单个核细胞,抽提总RNA,RT-PCR扩增人颗粒溶素的基因片段,并将其插入pMD18-T进行测序,鉴定正确后分别将目的基因亚克隆至pET32a(+),构建原核表达质粒pET-GNLY9K和pET-GNLY15K,将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western-blot鉴定融合蛋白的正确性.MTT检测颗粒溶素融合蛋白的生物活性.结果 成功构建了原核表达载体pET-GNLY9K和pET-GNLY15K,经诱导在原核表达系统中高效表达了相应分子质量约31和37 ku的融合蛋白,重组颗粒溶素融合蛋白能特异地与抗颗粒溶素抗体结合,GNLY9K融合蛋白可以明显抑制A549细胞增殖,而GNLY15K融合蛋白对细胞增殖影响极低.结论 利用原核表达体系成功地表达了不同分子质量的颗粒溶素融合蛋白,为颗粒溶素的后续研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	居军	甘肃省人民医院临床检验中心	44	168	7.0	9.0
2	徐向红	甘肃省人民医院临床检验中心	17	34	4.0	5.0
3	王晚霞	甘肃省人民医院临床检验中心	6	6	2.0	2.0