颗粒溶素重组表达载体的构建和原核表达

• 作者: 仲人前 周晔 柯金山 谷明莉 邓安梅 钱(王争) 陆慧琦 陈孙孝 陈燕
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 颗粒溶素 原核表达 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 778-781
• 页数: 4页
• 分类号: R383.2
• 字数: 3896字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建人颗粒溶素(Granulysin,GNLY)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达.方法:抽提体外培养的单个核细胞总RNA,通过RT-PCR的方法获得含有222 bp的颗粒溶素cDNA , 克隆到pMD18-T 载体,测序正确后再亚克隆到质粒pET28a(+) 中,构建重组表达质粒pET28a(+)-GNLY,在大肠杆菌中诱导表达并经Ni亲和层析纯化.用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.采用MTT法检测GNLY融合蛋白的生物学活性.结果:酶切结果证实,成功地构建了GNLY原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致.结论:成功构建了重组表达质粒pET28a(+)-GNLY,并在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达,获得了具有良好的抗原性和特异性的GNLY融合蛋白,为下一步研究人GNLY的功能奠定了基础.