基因捕获筛选TGF-β1诱导间充质干细胞C3H/10T1/2平滑肌分化的差异表达基因

• 作者: 叶枫 姜帆 孙慧勤 王明科 程晋 粟永萍 邹仲敏
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 基因捕获 转化生长因子-β1 间充质干细胞 平滑肌分化
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 92-97
• 分类号: R322.74|R394-33|R394.3
• 语种: 中文

摘要

目的 利用基因捕获方法,分离转化生长因子-B1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导小鼠胚胎间充质干细胞C3H/10TI/2(简称10T1/2细胞)平滑肌分化前后差异表达基因.方法 5 ng/mL TGF-β1诱导10T1/2细胞平滑肌分化,倒置显微镜下观察细胞形态学改变,RT-PCR鉴定平滑肌分化相关基因alpha平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,αSMA)、平滑肌22 alpha(smooth muscle 22 alpha,SM22α)、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)和血清应答因子(serum response factor,SRF),免疫细胞化学实验检测αSMA.TGF-β1诱导建立的10T1/2细胞基因捕获阳性克隆库分化前后进行LacZ染色.cDNA末端快速扩增法(rapid amplification of cDNA ends,RACE)及电子克隆分离差异表达序列,在GenBank网站nBLAST进行生物信息学分析,用GenBank网站在线软件BankIt提交GenBank获取ID号,用pI/Mw软件计算蛋白分子量、等电点.Real-time PCR检测新基因mgt-16在BALB/c小鼠小肠、骨骼肌及心肌的表达.结果 细胞形态学、RT-PCR及免疫细胞化学实验鉴定TGF-β1成功诱导10T1/2细胞平滑肌分化.LacZ染色筛选获得2个平滑肌分化后差异表达克隆.RACE、电子克隆和nBLAST分析后发现为线粒体核糖体蛋白S6(mitochondrial ribosomal protein S6,Mrps6)和新基因mgt-16.mgt-16基因位于19号染色体,编码一个93个氨基酸的蛋白(命名为mgt-16),相对分子质量为9 772.02,等电点为6.04,提交后ID号为GU266552.新基因mgt-16在BALB/c小鼠小肠表达较高,而在骨骼肌、心肌表达较低.结论 利用基因捕获分离获得了TGF-β1诱导平滑肌分化前后2个差异表达基因:Mrps6和新基因mgt-16.