旋转超滤:一种提取细胞外泌体的新方法

• 作者: 刘鹃 李青 汪泱 沈晓黎 牛鑫 胡国文 胡斌 邓志锋
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 外泌体 间质干细胞 旋转超滤 透射电子显微镜检查
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 598-602
• 分类号: R329.28
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1008.2014.00598

摘要

目的 建立一种利用旋转超滤技术从骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)培养上清液中分离外泌体(exosome)的方法.方法 收集BMSCs细胞培养上清,低速离心去除残余细胞,0.22 μm滤器过滤除去细胞碎片,采用旋转超滤技术提取外泌体.应用透射电子显微镜观察所获外泌体的形态,用蛋白质印迹法检测外泌体标记物CD63、CD9蛋白的表达,用CCK-8试剂盒检测外泌体对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖活性的影响.结果 使用旋转超滤技术成功分离出BMSCs分泌的外泌体,透射电镜下外泌体为圆形或椭圆形,直径约100 nm,蛋白质免疫印迹法检测结果显示外泌体中有其特异标记物CD63、CD9蛋白的表达.外泌体能够促进HUVECs增殖,并且其促细胞增殖作用随浓度增高而增强.结论 旋转超滤技术是一种简单有效的提取外泌体的方法.