人源蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2基因克隆与原核表达

• 作者: 刘永真 庞晓斌 李晓婷 杜冠华 谢欣梅 赵清辉
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: SHP-2 基因克隆 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 846-849
• 分类号: Q75|Q78|Q55
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2014.05.012

摘要

目的:构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2的原核表达载体并在大肠杆菌中表达.方法:以人脑组织mRNA为模板,通过RT-PCR扩增出目标cDNA,构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2-pEASY-E1重组质粒.将重组质粒转化进E.coli TOP10感受态细胞中,通过菌落PCR和测序进行阳性克隆的筛选和验证,将正确的质粒转化E.coli Transetta感受态细胞中,通过SDS-PAGE和westem-blot进行蛋白检测和验证,酶促动力学分析SHP-2可溶性蛋白的活性.结果:成功克隆SHP-2功能域,构建SHP-2-pEASY-E1原核表达载体,完成可溶性蛋白的表达；酶促动力学分析结果为:米氏常数Km=0.97mmol/L,Vmax为13.57mmol/L/s.结论:本研究成功构建SHP-2的原核表达载体,重组表达的SHP-2蛋白具有较高的磷酸酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢欣梅	河南大学药物研究所	27	136	7.0	11.0
2	庞晓斌	河南大学药物研究所	39	129	7.0	9.0
3	赵清辉	河南大学药物研究所	5	3	1.0	1.0
4	李晓婷	河南大学药物研究所	12	18	2.0	4.0
5	刘永真	河南大学医学院	5	7	1.0	2.0