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摘要:
目的:构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2的原核表达载体并在大肠杆菌中表达.方法:以人脑组织mRNA为模板,通过RT-PCR扩增出目标cDNA,构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2-pEASY-E1重组质粒.将重组质粒转化进E.coli TOP10感受态细胞中,通过菌落PCR和测序进行阳性克隆的筛选和验证,将正确的质粒转化E.coli Transetta感受态细胞中,通过SDS-PAGE和westem-blot进行蛋白检测和验证,酶促动力学分析SHP-2可溶性蛋白的活性.结果:成功克隆SHP-2功能域,构建SHP-2-pEASY-E1原核表达载体,完成可溶性蛋白的表达;酶促动力学分析结果为:米氏常数Km=0.97mmol/L,Vmax为13.57mmol/L/s.结论:本研究成功构建SHP-2的原核表达载体,重组表达的SHP-2蛋白具有较高的磷酸酶活性.
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文献信息
篇名 人源蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2基因克隆与原核表达
来源期刊 现代生物医学进展 学科 生物学
关键词 SHP-2 基因克隆 蛋白表达
年,卷(期) 2014,(5) 所属期刊栏目 基础研究
研究方向 页码范围 846-849
页数 分类号 Q75|Q78|Q55
字数 语种 中文
DOI 10.13241/j.cnki.pmb.2014.05.012
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 谢欣梅 河南大学药物研究所 27 136 7.0 11.0
2 庞晓斌 河南大学药物研究所 39 129 7.0 9.0
3 赵清辉 河南大学药物研究所 5 3 1.0 1.0
4 李晓婷 河南大学药物研究所 12 18 2.0 4.0
5 刘永真 河南大学医学院 5 7 1.0 2.0
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研究主题发展历程
节点文献
SHP-2
基因克隆
蛋白表达
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
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现代生物医学进展
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2001
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