偏肿革裥菌Lg-mnp1基因克隆及表达研究

• 作者: 吴书景 池玉杰 闫洪波
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 偏肿革裥菌 锰过氧化物酶 基因克隆 毕赤酵母 基因表达
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 3186-3190
• 页数: 5页
• 分类号: S718.81
• 字数: 5507字
• 语种: 中文

摘要

[目的]研究偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况.[方法]根据白腐菌锰过氧化物酶(MnP)基因保守序列设计引物,采用PCR、RACE及染色体步移等方法,克隆偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因(GenBank登录号JQ327834),进行蛋白序列分析,并通过双酶切的方法获得重组质粒,将该重组质粒电转化至巴斯德毕赤酵母中进行异源表达.[结果]获得偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因,命名为Lg-mnp1.蛋白序列分析表明Lg-MnP1含有4个二硫键属于短MnP,预测成熟蛋白分子量为35.94kD,pI为4.43.通过双酶切的方法将Lg-mnp1的开放阅读框(ORF)序列连接到pPICZB载体上,获得重组质粒pPICZB/%-mnp1,转化子经PCR验证后,在BMMY培养基中甲醇诱导培养,在未添加血红素的培养液中MnP胞外酶活在72 h达到最高为7 U/L,表明Lg-mnp1已被转化至毕赤酵母中并可诱导表达.[结论]该方法对偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况进行研究,为偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的进一步应用提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	池玉杰	东北林业大学林学院	75	791	12.0	25.0
2	闫洪波	东北林业大学林学院	9	86	4.0	9.0
3	吴书景	东北林业大学林学院	3	7	2.0	2.0